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酵母單雜交文庫篩選技術服務

我們擁有多年的文庫構建和篩選經驗,已完成數千個各類文庫,訂單來自海內外,可以有效保證文庫的覆蓋度和文庫篩選目的基因的檢出。

  • 產品詳情

酵母單雜交文庫篩選技術服務(使用clonetechpGADT7或者pGADT7-Rec2兩套系統進行篩選,可以使用預制商業化文庫或者本公司定制構建的酵母雜交文庫)

  1.酵母單雜交的基本原理

       酵母單雜交技術是1993年由酵母雙雜交技術發展而來的,其基本原理為:真核生物基因的轉錄起始需轉錄因子參與,轉錄因子通常由一個DNA特異性結合功能域和一個或多個其他調控蛋白相互作用的激活功能域組成,即DNA結合結構域(DNA—bindingdomain,BD)和轉錄激活結構域(activationdomain,AD)。用于酵母單雜交系統的酵母GAL4蛋白是一種典型的轉錄因子,GAL4的DNA結合結構域靠近羧基端,含有幾個鋅指結構,可激活酵母半乳糖苷酶的上游激活位點(UAS),而轉錄激活結構域可與RNA聚合酶或轉錄因子TFIID相互作用,提高RNA聚合酶的活性。在這一過程中,DNA結合結構域和轉錄激活結構域可完全獨立地發揮作用。據此,我們可將GAL4的DNA結合結構域置換為文庫蛋白編碼基因,只要其表達的蛋白能與目的基因相互作用,同樣可通過轉錄激活結構域激活RNA聚合酶,啟動下游報告基因的轉錄。                                 

 2.酵母單雜交技術的特點

        酵母單雜交體系自1993年由Wang和Reed創立以來,在生物學研究領域中已經顯示出巨大的威力。應用酵母單雜交體系已經驗證了許多已知的DNA與蛋白質之間的相互作用,同時發現了新的DNA與蛋白質的相互作用,并由此找到了多種新的轉錄因子。近來,已有應用酵母單雜交體系進行疾病診斷的研究報道。隨著酵母單雜交體系的不斷發展和完善,它在科研、醫療等方面的應用將會越來越廣泛。采用酵母單雜交體系能在一個簡單實驗過程中,識別與DNA特異結合的蛋白質,同時可直接從基因文庫中找到編碼蛋白的DNA序列,而無需分離純化蛋白,實驗簡單易行。由于酵母單雜交體系檢測到的與DNA結合的蛋白質是處于自然構象,克服了體外研究時蛋白質通常處于非自然構象的缺點,因而具有很高的靈敏性。目前,多種酵母單雜交體系的試劑盒和相應的cDNA文庫已經商品化,為酵母單雜交體系的使用提供了有利的條件。
    但酵母單雜交也存在以下缺點:有時由于插入的靶元件與酵母內源轉錄激活因子可能發生相互作用,或插入的靶元件不需要轉錄激活因子就可以激活報告基因的轉錄,因此往往產生假陽性結果。如果酵母表達的AD融合蛋白對細胞有毒性,或融合蛋白在宿主細胞內不能穩定地表達,或融合蛋白發生錯誤折疊,或者不能定位于酵母細胞核內,以及融合的Gal4AD封閉了蛋白質上與DNA相互作用的位點,則都可能干擾AD融合蛋白結合于靶元件的能力,從而產生假陰性結果。

 3.酵母單雜交的基本操作過程

     (1)設計含目的基因(稱為誘餌)和下游報告基因的質粒,并將其轉入酵母細胞。
    (2)將文庫蛋白的編碼基因片段與GAL4轉錄激活域融合表達的cDNA文庫質粒轉化人同一酵母中。
    (3)若文庫蛋白與目的基因相互作用,可通過報告基因的表達將文庫蛋白的編碼基因篩選出來。在這里作為誘餌的目的基因就是啟動子DNA片段,文庫基因所編碼的蛋白就是啟動子基因結合蛋白。

 4.酵母單雜交技術的用途

      迄今為止,應用酵母單雜交體系已經識別并驗證了許多與目的DNA序列結合的蛋白質,同時單雜交技術還被應用于識別金屬反應結合因子。正向與反向單雜交體系的結合,還可用于篩選阻礙DNA與蛋白質相互作用的突變的單個核苷酸. 目前,在研究DNA—蛋白質相互作用中,酵母單雜交體系主要有以下3種用途:①確定已知DNA—蛋白質之間是否存在相互作用;②分離結合于目的順式調控元件或其他短DNA結合位點蛋白的新基因;③定位已經證實的具有相互作用的DNA結合蛋白的DNA結合結構域,以及準確定位與DNA結合的核苷酸序列。

 5.我們的工作內容

    您只需提供用于篩選的誘餌質粒信息,我們會完成整個的篩選工作,主要包括以下內容:
    3.1 誘餌載體的構建
    3.2 誘餌質粒的自激活檢測
    3.3 文庫質粒和誘餌質粒共轉酵母感受態細胞
    3.4 文庫篩選和3AT優化
    3.5 文庫篩選結果測序分析
    3.6 篩選結果回轉驗證
    3.7 詳細報告的整理和數據發送

 6.交付結果

    提供詳細的、完整的實驗報告,清晰的實驗圖片,篩選結果的測序結果,質粒等。

 7.服務報價

    3萬元整

 8.服務周期

    80個工作日

9.客戶文章示例

核蛋白酵母雙雜交文庫客戶文章示例:

【1】Yeast-2-Hybrid data file showing progranulin interactions in human fetal brain and bone marrow libraries[J],ata in Brief, Volume 9, December 2016, Pages 1060-1062

【2】Zhenhai Yu, Yingying Ge, Lei Xie,et al. Using a yeast two-hybrid system to identify FTCD as a new regulator for HIF-1α in HepG2 cells[J],Cellular Signalling, Volume 26, Issue 7, July 2014, Pages 1560-1566

【3】Zhanyang Yu,1 Ning Liu,1 Yi Wang,2 Xiaokun Li,et al. Identification of Neuroglobin-interacting Proteins Using Yeast Two-hybrid Screening. Neuroscience. 2012 Jan 3; 200: 99–105.

【4】Cui LG, Shan JX, Shi M, et al. DCA1 Acts as a Transcriptional Co-activator of DST and Contributes to Drought and Salt Tolerance in Rice. PLoS Genet. 11, e1005617 (2015).

【5】Jing Ning, Baocai Zhang, Nili Wang, Increased Leaf Angle1, a Raf-Like MAPKKK That Interacts with a Nuclear Protein Family, Regulates Mechanical Tissue Formation in the Lamina Joint of Rice. The Plant Cell, Vol. 23: 4334–4347, December 2011.

【6】Raksha Singh, Mi-Ok Lee, Jae-Eun Lee, Jihyun Choi, Rice Mitogen-Activated Protein Kinase Interactome Analysis Using the Yeast Two-Hybrid System. Plant Physiology, September 2012.Vol.160,

【7】X.F.Zha, M.Zhao, C.Y.Zhou, H.Z.Guo. Analysis of interaction between Bmhrp28 and BmPSI in sex-specific splicing of Bombyx mori Bmdsx gene. Genetics and Molecular Research 13 (3): 5452-5462 (2014)

【8】Chao Zhang, Rongchao Ge, Junwen Zhang, Identification and Expression Analysis of a Novel HbCIPK2-Interacting Ferredoxin from Halophyte H. brevisubulatum.PLOS. December 4, 2015.

【9】Deng X1, Guo D2, Yang S1, Shi M1, Chao J1, Li H2, Peng S2, Tian W1. Jasmonate signalling in the regulation of rubber biosynthesis in laticifer cells of rubber tree, Hevea brasiliensis. J Exp Bot. 2018 Jun 27;69(15):3559-3571. doi: 10.1093/jxb/ery169.


酵母單雜交文庫客戶文章示例:

【1】Nobutaka Mitsuda,Miho Ikeda,Shinobu Takada,et al.Efficient Yeast One-/Two-Hybrid Screening Using a Library Composed Only of Transcription Factors in Arabidopsis thaliana.Plant Cell Physiol (2010) 51 (12): 2145-2151.

【2】Chang-Qing Yang1, Xin Fang1, Xiu-Ming Wu1, et al. Transcriptional Regulation of Plant Secondary Metabolism. Journal of Integrative Plant Biology 2012, 54 (10): 703–712

【3】Zejun Huang, Zhijin Zhang, Xiuling Zhang,et al. Tomato TERF1 modulates ethylene response and enhances osmotic stress tolerance by activating expression of downstream genes. FEBS Letters.Volume 573, Issues 1–3, 27 August 2004, Pages 110-116

【4】Deng X1, Guo D2, Yang S1, Shi M1, Chao J1, Li H2, Peng S2, Tian W1. Jasmonate signalling in the regulation of rubber biosynthesis in laticifer cells of rubber tree, Hevea brasiliensis. J Exp Bot. 2018 Jun 27;69(15):3559-3571. doi: 10.1093/jxb/ery169.

膜蛋白雙雜交文庫客戶文章示例:

【1】Yasuyuki Nakamura, Jun Ishii, Akihiko Kondo. Rapid, Facile Detection of Heterodimer Partners for Target Human G-Protein-Coupled Receptors Using a Modified Split-Ubiquitin Membrane Yeast Two-Hybrid System.PLOS one. June 2013 , Volume 8 ,Issue 6.

【2】Zhe Ma, Hui Zhang, Junxi Zheng. Interaction between M-Like Protein and Macrophage Thioredoxin Facilitates Antiphagocytosis for Streptococcus equi ssp. Zooepidemicus.PLOS one. February 2012 ,Volume 7, Issue 2.

【3】Pratima Pandey and Singh Harbinder. The Caenorhabditis elegans D2-like dopamine receptor DOP-2 physically interacts with GPA-14, a Gαi subunit. Pandey and Harbinder Journal of Molecular Signaling 2012.

 中文論文:

【1】張云云,周 君, 李 曄. 可口革囊星蟲(Phascolosoma esculenta)酵母雙雜交文庫和鐵結合蛋白真核表達載體的構建. 海洋與湖沼,44卷,第6期。

【2】歐陽沫, 唐瀟,黃惜,袁紅梅。巴西橡膠樹HbICE1 基因酵母雙雜交誘餌載體的構建及互作蛋白的篩選。植物科學學報,2016,34(2): 255~262.

【3】岳珊珊,夏來新。酵母雙雜交篩選與果蠅C(2)M相互作用的蛋白。遺傳,2015.11,37(11)

【4】專利:一種結合串聯重復序列(TTTACAC)5的Dof蛋白質



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