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均一化cDNA文庫構建

均一化cDNA文庫是克服基因轉錄水平上巨大差異給文庫的篩選和分析帶來障礙的有效措施,有利于研究基因的表達和分析。現在,在構建均一化cDNA文庫中至少有兩種主要的觀點。一種是基于復性動力學的原理,高豐度的cDNA在退火下復性速度快,而低豐度的cDNA復性要很長時間,從而可以通過控制復性時間來降低豐度;另一種是基于基因組DNA在拷貝數上具有相對均一化的性質,通過cDNA和DNA的飽和雜交而降低在文庫中高拷貝存在的cDNA的豐度。我們主要通過第一種方法實現均一化,以達到降低基因間拷貝數差異,有助于低拷貝基因的篩選。

  • 產品詳情

均一化cDNA文庫構建

    1. 服務流程

      1.1  RNA提取
      1.2  mRNA分離
      1.3  cDNA合成與均一化處理
      1.4  cDNA長度分級
      1.5  分級后的cDNA與目的載體的all-direct重組
      1.6  重組產物電轉化
      1.7  均一化cDNA文庫的鑒定
        a) 檢測庫容量(總CFU)
        b) 隨機挑取32個克隆子,PCR方法檢測平均插入片段大小。
        c) 抽提均一化cDNA文庫的混合質粒(大抽),qPCR檢測均一化前后兩個文庫總質粒中兩個看家基因的表達量差異,以判斷均一化的效果。

   2.送樣要求

      2.1  針對每個文庫,客戶需提供200ug以上的RNA或2g以上的組織樣本。

   3.發貨內容

     3.1  我們提供構建好的cDNA文庫的甘油菌液(含20%甘油的LB培養基),隨機克隆子的PCR鑒定圖譜,文庫構建報告。

   4.質量標準

     4.1  文庫庫容量:大于1*10^5 CFU。
     4.2  平均插入片段:大于1.2Kbp。
     4.3  陽性率:大于95%。
     4.4  均一化后相對于均一化前看家基因拷貝數降低50倍以上。

   5.服務時間

    25個工作日內

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Invitrogen-Gateway方法酵母雙雜交文庫構建(核系統與膜系統)以及酵母單雜交文庫構建(核系統)
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