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ElectroMAX DH10B T1抗噬菌體電轉化感受態細胞

產品簡述

  • 產品詳情

  • 產品描述

    ElectroMAX DH10B T1噬菌體抗性感受態細胞提供的轉化效率是我們提供的任何產品所達到的最高效率,并且效率可超過3 x 1010cfu /μg質粒DNA。它們是需要高效轉化的應用的理想選擇,包括cDNAgDNA文庫構建。ElectroMAX DH10B-T1細胞最大限度地提高有限克隆產物的轉化率,允許有效克隆甲基化DNA,T1T5噬菌體有抗性,在含有X-GalBluo-Gal的平板上通過α-互補支持藍/白篩選,提供用于下游應用的高產量質粒對照。

    承諾質量同進口的產品,不同于國內其他公司提供的虛假轉化效率產品,不達標不收費。

     

    貨號

    規格

    價格

    HKR2018-01

    100ul*5

    2000.00

     

    基因型

     F-mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) Φ80lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 endA1 araD139Δ(araleu)7697 galgalK λ-rpsnuptonA

    產品說明

    DH10B-T1電擊感受態細胞只能用于電擊轉化,不能用于熱激轉化。DH10B-T1菌株來源于MC1061菌株,mcrAmcrBCmrr突變使DH10B菌株適合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的DNA (無論真核生物還是原核生物的基因組DNA都能被高效的轉入DH10B)recA1endA1的突變有利于插入DNA的穩定和高純度質粒DNA的提取。φ80dlacZ?M15標記的存在使DH10B可用于藍白斑篩選,rpsL賦予其鏈霉素抗性。 DH10B感受態細胞適用于大質粒的構建或者各種文庫構建,經特殊工藝制作,pUC19質粒檢測轉化效率>3X1010 cfu/μg DNA

    操作方法

    1. 2.5px 電擊杯和杯蓋從儲存液中拿出倒置于干凈的吸水紙上5分鐘,待其瀝干水分,正置5分鐘,使乙醇充分揮發,待乙醇揮發干凈立即插入冰中,壓實冰面,電極杯頂離冰面0.5 cm以方便蓋上杯蓋,冰中靜置5分鐘充分降溫。

    2. -80℃保存的DH10B電擊感受態細胞插入冰中分鐘,待其融化,加入目的DNA (質粒或連接產物)并用手撥打EP管底輕輕混勻,避免產生氣泡,立即插入冰中。

    A. 測定轉化效率使用μl 10 pg/μl的對照質粒 pUC19

    B. 對于連接產物,請用乙醇沉淀DNA后加入適量TE緩沖液 (10mM Tris HCl, pH7.5; 1mM EDTA)重懸,DNA濃度不超過100ng/μl,體積不超過5μl/50μl感受態。

    3. 200 μl槍頭將感受態-DNA混合物快速移到電擊杯中,避免產生氣泡,蓋上杯蓋。

    4. 啟動電轉儀,設置參數:C=25 μFPC=200 Ω,V=1.8 kV (此為BioRad 電轉儀推薦參數,也可按所用電轉儀推薦的參數操作),將電擊杯快速放入電轉槽中,電擊完成快速插入冰中。

    5. 2分鐘后從冰中取出電擊杯,放室溫,加入700 μl不含抗生素的無菌S.O.C. 培養基(室溫),用1ml槍吹吸電擊杯底部數次混勻后,轉移到50ml離心管(BD Falcon50ml錐形離心管等),向離心管中補加S.O.C. 培養基至5ml37℃,225 rpm復蘇60分鐘。

    6. 5000rpm離心一分鐘收菌,重懸后取100-200 μl涂布到含相應抗生素的S.O.C平板上(因菌量較大,若全部涂板請選用直徑375px培養皿2-5個)。將平板倒置放于37℃培養箱過夜培養13-17小時。

     

    注意事項

    1. 加入DNA時體積不應大于感受態體積的1/10

    2. 電擊感受態細胞加入電擊杯應避免產生氣泡,氣泡會增加弧光放電風險。

    3. DNA不純或存在鹽,乙醇,蛋白及緩沖液等污染時,轉化效率急劇下降。

    4. 電擊杯里的離子可增加溶液的電導,增大在含有細胞和DNA的溶液中產生電流和弧光放電的風險。

    5. 若轉化大質粒或想獲得較高轉化效率,推薦使用高純質粒提取試劑盒提取質粒。質粒增大一倍,轉化效率下降一個數量級。

    6. 對于連接產物轉化,最好轉化前乙醇沉淀DNA后用適量TE緩沖液 (10 mM Tris HCl, pH7.5; 1 mM EDTA)重懸產物,保證DNA濃度不超過100 ng/μl。過高濃度連接產物或過大體積連接產物會降低轉化效率,增加弧光放電的風險。

    7. 混入質粒時應輕柔操作,吸取感受態細胞時不可用孔徑過小的槍頭 (普通200ul槍頭應剪去槍頭尖15px) 避免用力過猛,以免剪切力過大損傷細胞膜,降低轉化效率。轉化高濃度的質粒或連接產物可相應減少最終用于涂板的菌量。

    8. 電擊感受態細胞最好保存在-80℃以下,高于-80℃超期儲存會導致轉化效率會下降。


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